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  3. 使变性DNA复性的条件是( )(1988年)

使变性DNA复性的条件是( )(1988年)

admin2013-03-03  41
问题 使变性DNA复性的条件是(        )(1988年)
选项 A、温度要逐渐冷下来
B、DNA不均一时易复性
C、DNA浓度高时易复性
D、DNA溶液中盐浓度高时不易复性
答案A,C
解析 DNA的复性指变性DNA在适当条件下，二条互补链全部或部分恢复到天然双螺旋结构的现象，它是变性的一种逆转过程。热变陛DNA一般经缓慢冷却后即可复性，此过程称之为退火。这一术语也用以描述杂交核酸分子的形成(见后)。DNA的复性不仅受温度影响．还受DNA自身特性等其他因素的影响。
    a)温度和时间：变性DNA溶液在比Tm低25℃的温度下维持一段长时间，其吸光率会逐渐降低。将此DNA再加热，其变性曲线特征可以基本恢复到第一次变性曲线的图形。这表明复性是相当理想的。一般认为比Tm低25℃左右的温度是复性的最佳条件，越远离此温度，复性速度就越慢。在很低的温度(如4℃以下)下，分子的热运动显著减弱互补链结合的机会自然大大减少。从热运动的角度考虑，维持在Tm以下较高温度，更有利于复性。复性时温度下降必须是一缓慢过程，若在超过Tm的温度下迅速冷却至低温(如4℃以下)，复性几乎是不可能的，核酸实验中经常以此方式保持DNA的变性(单链)状态。这说明降温时间太短以及温差大均不利于复性。
    b)DNA浓度：复性的第一步是两个单链分子间的相互作用“成核”。这一过程进行的速度与DNA浓度的平方成正比。即溶液中DNA分子越多，相互碰撞结合“成核”的机会越大。
    c)DNA顺序的复杂性：简单顺序的DNA分子，如多聚(A)和多聚(U)这两种单链序列复性时，互补碱基的配对较易实现。而顺序复杂的DNA，如小牛DNA的非重复部分，一般以单拷贝存在于基因组中，这种复杂特定序列要实现互补，显然要比上述简单序列困难得多。溶液的离子强度对复性速度也有影响，通常盐浓度较高时，复性速度较快。
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