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医学
常用于从转化菌中筛选DNA重组体的方法不包括
常用于从转化菌中筛选DNA重组体的方法不包括
admin
2012-11-29
55
问题
常用于从转化菌中筛选DNA重组体的方法不包括
选项
A、cc互补筛选
B、插入失活筛选
C、杂交筛选
D、质粒的小量快速提取
E、DNA序列测定筛选
答案
D
解析
DNA重组体的筛选常用的方法有6种。①生物学方法:A.表型筛选法,通过插入失活标记表型筛选阳性克隆。B.抗药性标志的筛选,克隆载体带有抗药性标志基因,转化后能在含该抗生素的平板上形成菌落,以区别转化菌与非转化菌。②β-半乳糖苷酶系统筛选:重组予由于基因插入使α肽基因失活,不能形成α互补,在含Xgal的平板上,含阳性重组子的细菌为无色菌落或噬菌斑。③菌落快速裂解鉴定法:从平板上直接挑选菌落裂解后,直接电泳检测载体质粒大小,判断有无插入片段存在。④内切酶图谱鉴定:经初筛鉴定有重组子的菌落,小量培养后,再分离出重组质粒或重组噬菌体DINA,用相应的内切酶切割,释放出插入片段。⑤通过聚合酶链反应筛选重组子:利用外源DNA插入位点两侧存在特定的序列作为引物,进行PCR分析,迅速扩增插入片段,判断是否阳性重组子,并对插入进行DNA序列分析。⑥菌落或噬菌斑原位杂交:将转化茵落或噬菌斑铺在硝酸纤维素膜或琼脂平板上,经转移后用标记的特异DNA探针进行分子杂交,挑选阳性菌落。
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