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  3. 基因诊断的基本方法中并不包括

基因诊断的基本方法中并不包括

admin2014-04-11  28
问题 基因诊断的基本方法中并不包括
选项 A、Southern印迹
B、PCR
C、DNA多态性连锁分析
D、微注射
答案D
解析 基因诊断可以通过Southern印迹法或聚合酶链反应(PCR)方法等直接检测基因突变。如果某些疾病的相关基因还不清楚或尚未克隆，难于进行直接检测，可利用基因多态性连锁分析间接检测。
    (1)Southern印迹法：South-ern印迹法是英国人E．Southern于1975年建立的，以其姓氏命名。这一方法的基本步骤为：①DNA经限制酶酶解切割成若干片段；②琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段；③DNA片段从凝胶转移并固定到硝酸纤维素膜(或尼龙膜)上；④利用探针进行杂交；⑤放射自显影。探针通常是已经克隆在适当载体(如质粒)中的基因片段(或cDNA、人工合成的寡聚核苷酸)，经过标记(同位素或荧光标记物)后用于探测样品中的核酸序列。
    (2)PCR方法通过一对寡聚核苷酸引物，在嗜热的DNA聚合酶作用下扩增特定的DNA序列。PCR通常可以扩增长度几百bp到～2kb的DNA片段。PCR反应体系中有：模板DNA、一对引物、嗜热的DNA聚合酶(一般为了TqDNA聚合酶)、4种dNTP(底物)、缓冲液等。引物是根据需要扩增的DNA序列(靶DNA)的3’端设计并合成的，两个引物(长约20个核苷酸)分别互补于模板DNA的两条链，方向相对。PCR反应大约需要30个循环以后，靶DNA的拷贝数一般可以扩增106倍(理论上108倍)。
    (3)DNA多态性连锁分析DNA多态性，是指在同种生物不同个体的基因组中经常存在的某些，DNA序列变异，这些变异并不影响基因功能。人基因组中大约每100～200bp范围内就有一个多态位点，这些位点按照共显性方式遗传，特别是单一碱基改变产生的多态性位点的遗传非常稳定，可以用于连锁分析。连锁是指一个基因(或一段DNA序列)与另一个基因在同一条染色体上相互靠近，两者同时遗传，因此前者可以作为后者的遗传标志。DNA多态性是连锁分析中使用最多的遗传标志，常用于基因诊断、疾病相关基因的定位、亲子鉴定等。迄今，DNA多态性的标记历经3代。第一代多态性标记是RFLP(限制性内切酶片段长度多态性)，即DNA多态性涉及某些限制性内切酶的识别位点是否存在，以至产生不同长度的DNA片段，可利用Southern印迹法或PCR产物酶切的方法检测。第二代多态性标记是STR(短串联重复)，即短重复序列多态性，是目前最有价值的遗传标记，可通过PCR检测。第三代多态性标记是SNP(单核苷酸多态性)，是指DNA序列中单一核苷酸(碱基)改变而产生的多态性，可通过测定PCR产物序列来检测。
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