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指出在pH 2.5、pH 3.5、pH 6、pH 8、pH 11.4时,四种核苷酸所带的电荷数(或所带电荷数多少的比较),并回答以下问题: (1)电泳分离四种核苷酸时,缓冲液应取哪个pH比较合适?此时它们是向哪一极移动?移动的快慢顺序如何?
指出在pH 2.5、pH 3.5、pH 6、pH 8、pH 11.4时,四种核苷酸所带的电荷数(或所带电荷数多少的比较),并回答以下问题: (1)电泳分离四种核苷酸时,缓冲液应取哪个pH比较合适?此时它们是向哪一极移动?移动的快慢顺序如何?
admin
2019-08-28
25
问题
指出在pH 2.5、pH 3.5、pH 6、pH 8、pH 11.4时,四种核苷酸所带的电荷数(或所带电荷数多少的比较),并回答以下问题:
(1)电泳分离四种核苷酸时,缓冲液应取哪个pH比较合适?此时它们是向哪一极移动?移动的快慢顺序如何?
(2)当要把上述四种核苷酸吸附于阴离子树脂柱上时,应调pH到多少?
(3)如果用洗脱液对限离子交换树脂上的四种核苷酸进行洗脱分离时,洗脱液应调pH到多少?这四种核苷酸上的洗脱顺序如何?为什么?
选项
答案
各种核苷酸带电荷情况如表所示: [*] (1)电泳分离四种核苷酸时应取pH 3.5的缓冲液,在该pH时,这四种单核苷酸之间所带负电荷差异较大,它们都向正极移动,但移动的速度不同,依次为:UMP>GMP>AMP>CMP。 (2)应取pH 8,这样可使各核苷酸带较多负电荷,利于核苷酸吸附于阴离子交换树脂柱。虽然pH 11.4时核苷酸带有更多的负电荷,但pH过高对树脂不利。 (3)洗脱液应调到pH 2.5,当不考虑树脂的非极性吸附时,洗脱顺序为MPT>AMP>GMP>UMP(根据pH 2.5时核苷酸负电荷的多少来决定洗脱速度),但实际上核苷酸和聚苯乙烯阴离子交换树脂之间存在着非极性吸附,嘌呤碱基的非极性吸附是嘧啶碱基的3倍。静电吸附与非极性吸附共同作用的结果使洗脱顺序为:CMP>AMP>UMP>GMP。
解析
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药学综合
专业硕士
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