2. 职业资格
  3. 某一质粒载体如图6所示，外源DNA插入到Ampr或Tetr中会导致相应的基因失活(Ampr表示氨苄青霉素抗性基因，Tetr表示四环素抗性基因)。有人将此质粒载体用BamH I酶切后，与用BamH I酶切获得的目的基因混合，加入DNA连接酶进行连接反应，用得

某一质粒载体如图6所示，外源DNA插入到Ampr或Tetr中会导致相应的基因失活(Ampr表示氨苄青霉素抗性基因，Tetr表示四环素抗性基因)。有人将此质粒载体用BamH I酶切后，与用BamH I酶切获得的目的基因混合，加入DNA连接酶进行连接反应，用得

admin2018-08-09  33
问题 某一质粒载体如图6所示，外源DNA插入到Ampr或Tetr中会导致相应的基因失活(Ampr表示氨苄青霉素抗性基因，Tetr表示四环素抗性基因)。有人将此质粒载体用BamH I酶切后，与用BamH I酶切获得的目的基因混合，加入DNA连接酶进行连接反应，用得到的混合物直接转化大肠杆菌。结果大肠杆菌有的未被转化，有的被转化。被转化的大肠杆菌有三种，分别是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入目的基因的重组质粒的大肠杆菌。回答下列问题：

    (1)质粒载体作为基因工程的工具，应具备的基本条件有__________(答出两点即可)。而作为基因表达载体，除满足上述基本条件外，还需具有启动子和终止子。
    (2)如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选，在上述三种大肠杆菌细胞中，未被转化的和仅含有环状目的基因的细胞是不能区分的，其原因是__________；并且含有质粒载体和含有插入了目的基因的重组质粒的细胞也是不能区分的，其原因是__________。在上述筛选的基础上，若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌的单菌落，还需使用含有__________的固体培养基。
    (3)基因工程中，某些噬菌体经改造后可以作为载体，其DNA复制所需的原料来自__________。
选项
答案(1)能够自我复制、具有标记基因、具有一个至多个限制酶切割位点 (2)二者均不含氨苄青霉素抗性基因，在该培养基上都不能生长；二者都含氨苄青霉素抗性基因，在该培养基上均能生长；四环素 (3)受体细胞
解析 (1)质粒载体作为基因工程的工具，应具备的基本条件有：能够自我复制、具有标记基因、具有一个至多个限制酶切割位点等。
    (2)依题意可知，目的基因插入位点在Tetr中，导致四环素抗性基因(Tetr)失活，而氨苄青霉素抗性基因(Ampr)仍能行使正常功能。如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选，在上述四种大肠杆菌细胞中．未被转化的和仅含有环状目的基因的细胞，因二者均不含氨苄青霉素抗性基因．在该培养基上都不能生长，所以是不能区分的；含有质粒载体和含有插入了目的基因的重组质粒的细胞，因二者都含氨苄青霉素抗性基因。在该培养基上都能生长，因此也是不能区分的。在上述筛选的基础上。若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌的单菌落，还需使用含有四环素的固体培养基；因目的基因插入后，导致四环素抗性基因失活，含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌在该培养基中不能生长．而含有质粒载体的则能正常生长。
    (3)噬菌体是专性在细菌细胞中寄生的细菌病毒。在侵染细菌时，噬菌体的DNA进入到细菌细胞中，而其蛋白质外壳留在细胞外：在噬菌体DNA的指导下，利用细菌细胞中的物质和能量合成噬菌体的组成成分。其DNA复制所需的原料来自宿主(受体)细胞，即大肠杆菌。
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