大肠菌群的测定的注意事项

admin2017-04-27  23

问题 大肠菌群的测定的注意事项

选项

答案(1)程序 大肠菌群的国标检验法采用三步法,即乳糖发酵、分离培养和证实试验。第一步乳糖发酵试验是样品的发酵结果,不是纯菌的发酵试验,所以初发酵阳性管,经过后两步,有可能成为阴性。大量检验数据证明,食品中大肠菌群检验程序的符合率、初发酵与证实试验相差很大,不同食品三步法的符合情况也不一致。一般来说,如果平板上有较多典型大肠菌群菌落,革兰氏染色为阴性杆菌,即可做出判定。如果平板上典型菌落较少或均不够典型,则应多挑菌落做证实试验,以免出现假阴性。只做一步初发酵,对某些食品来说误差较大。这样做,会有相当部分的合格样品被作为不合格样品处理,应予以注意。 (2)挑取菌落 大肠菌群是一群肠道杆菌的总称,大肠菌群菌落的色泽、形态等复杂多样,而且与大肠菌群的检出率密切相关。在实际工作中,为了提高大肠菌群的检出率,应当熟悉其菌落的形态和色泽。在检验方法中我们选用伊红美蓝平板为分离培养基,在该平板上,大肠菌群菌落大多呈紫黑色有金属光泽或无金属光泽。菌落形态的其他方面(如菌落的大小、光滑与粗糙、边缘完整情况、隆起情况、湿润与干燥等)虽也应注意,但不如色泽方面更为重要。 挑取菌落数与大肠菌群的检出率也有密切的关系。在实际工作中由于工作量较大,通常只挑取一个菌落,但影响大肠菌群检出率的因素很多,如食品种类、菌落色泽和形态、细菌种类等,只挑取一个菌落,由于几率问题,很难避免假阴性的出现,尤其当菌落不典型时。所以,挑取菌落时一定要挑取典型菌落,若无典型菌落则应多挑取几个菌落,以免出现假阴性。 (3)产气量 在糖发酵试验中经常可以看到,在发酵套管内存在极微小的气泡(有时比小米粒还小),类似这种情况能否算作产气阳性,这是许多人经常遇到的问题。大肠菌群的产气量,多者可以使发酵套管充满气体,少者产生比小米粒还小的气泡。一般来说,产气量与大肠菌群检出率呈正相关,但随样品种类而有不同,有米粒大小气泡的也有阳性检出。另外,对未产气的乳糖发酵管是否均应做阴性处理,根据大量实践工作经验来看,对这种情况应慎重考虑,有时会遇到在初发酵时产酸元气,但复发酵却证实为大肠菌群阳性。有时套管内虽无气体,但在液面及管壁可以看到缓缓上升的小气泡。所以对未产气的发酵管有疑问时,可以用手轻轻敲动或摇动试管,若有气泡沿管壁上浮,即考虑为有气体产生,应做进一步试验观察。这种情况的阳性检出率可达半数以上。 (4)MPN检索表(见附录I) 最可能数(MPN)是表示样品中活菌密度的估测。MPN检索表是采用三个稀释度九管法,稀释度的选择是基于对样品中菌数的估测,较理想的结果应是最低稀释度3管为阳性,而最高稀释度3管为阴性。如果无法估测样品中的菌数,则应做一定范围的稀释度。

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